Набор реагентов для иммунохроматографического выявления 5-ти специфических кардиомаркеров в сыворотке (плазме) или цельной крови "ИХА-КАРДИО-ФАКТОР"

Вскрыть упаковку планшета, разрывая ее вдоль прорези, извлечь планшет и положить на сухую горизонтальную поверхность тестовой зоной вверх.

Сыворотка (плазма):

• Внести с помощью пипетки для внесения образца 2 капли сыворотки или плазмы (~80 мкл) в окошко планшета для внесения образца.
• Через 10 минут визуально оценить результат.

Цельная кровь:

• Внести с помощью пипетки для внесения образца 1 каплю цельной крови (~40 мкл) в окошко планшета для внесения образца.
• Добавить 2 капли (~80 мкл) реагента для разведения образца в то же окошко.
• Через 10 минут визуально оценить результат.

• Положительный результат: Выявление в тестовой зоне планшета окрашенных линий розово-фиолетового цвета на уровне любой линии Т (тест) а также С (контроль) свидетельствует о том, что в анализируемом образце содержатся указанные кардиомаркеры в концентрациях выше пороговых:

• Отрицательный результат: Выявление в тестовой зоне только одной линии розово-фиолетового цвета на уровне маркировки С (контроль) свидетельствует о том, что в анализируемом образце кардиомаркеры не содержатся или их концентрации ниже пороговой:

• Ошибочный результат: В случае отсутствия линии розово-фиолетового цвета на уровне маркировки С (контроль) вне зависимости от наличия окраски в тестовой зоне (Т) анализ признается недействительным; при этом определение необходимо повторить с использованием другого планшета:

О клиническом диагностическом значении каромаркеров читайте в разделе Краткая информация о каромаркерах. 

• тестовое устройство в герметичной упаковке - 1 шт.
• реагент для разведения - 1,5 мл.
• скарификатор - 1 шт.
• антисептическая одноразовая салфетка - 1 шт.
• пипетка для внесения образца - 1 шт.
• инструкция по применению – 1шт.

Тропонин. В мышечной клетке присутствуют три формы тропонинов - I, Т и С, в соотношении 1:1:1. Они входят в состав тропонинового комплекса (рис.1), который связан с белком тропомиозином. Последний вместе с актином образует тонкие филаменты миоцитов – важнейший компонент сократительного аппарата клеток поперечно-полосатой мускулатуры. Все три тропонина участвуют в кальций-зависимой регуляции акта сокращения – расслабления.

Рис. 1. Тропомиозиновый комплекс.

• ТнС  (мол. м. 20 000 дальтон) – является кальцийсвязывающей субъединицей, инициирующей сокращение мышечной клетки.
• ТнI  (мол. м. 24 000 дальтон) - является ингибирующей субъединицей тропомиозинового комплекса, связывающей актин в период расслабления и тормозящей АТФ-азную активность актомиозина, таким образом предотвращая мышечное сокращение в отсутствие ионов кальция.
• ТнТ (мол. м. 37 000 дальтон) - является регуляторной субъединицей, прикрепляющей тропониновый комплекс к тонким филаментам и тем самым участвуя в кальций-регулируемом акте сокращения.

 В диагностике инфаркта миокарда используются кардиальные изоформы сТnI и Т сТnТ. Они существенно отличаются от их изоформ, локализующихся в скелетной мускулатуре, поэтому могут быть отдифференцированы от аналогичных белков скелетных мышц иммунологически, с помощью моноклональных антител. Именно такой подход и используется в методах их иммунотестирования. Благодаря высокой кардиоспецифичности сердечных изоформ тропонин в настоящее время считается «золотым стандартом» в диагностике инфаркта миокарда.

Кардиальный ТнС в противоположность сТnI и Т сТnТ, совершенно идентичен по структуре мышечному ТнС и, следовательно, не является кардиоспецифичным протеином и поэтому не используется в диагностике инфаркта миокарда.

При ишемическом или каком-либо другом повреждении клеток миокарда тропониновый комплекс распадается, и молекулы тропонина попадают в кровь. Уже через 3-6 часов после случившегося, концентрацию тропонинов в крови можно определить современными лабораторными методами.

Креатинкиназа  – фермент, осуществляющий превращение фосфокреатина с образованием креатина и АТФ (ресинтез АТФ в реакции трансфосфорилирования АДФ и креатинфосфата), который необходим для мышечного сокращения. Общая активность креатинкиназы складывается из активности изоформ фермента – CK-MM, CK-BB и CK-MB, где М-мышечная субъединица фермента (muscle) и В-мозговая (brain). Изоформа CK-BB в основном присутствует в ткани мозга, легких, в желудке. Изофермент CK-MM характерен для мышечной ткани, а изоформа CK-MB сконцентрирована в ткани сердца. При поражении сердечной мышцы именно эта изоформа выходит из клеток сердца в кровяное русло, что сопровождается увеличением концентрации изофермента в крови.

Миоглобин - железосодержащий белок мышечных клеток, который отвечает за транспорт кислорода в скелетных мышцах и в мышце сердца. Повышение уровня белка в крови наблюдается через 2 часа после появления боли при инфаркте миокарда. Уровень миоглобина повышается самым первым из всех кардиомаркеров, степень повышения зависит от площади поражения миокарда. Это самый «короткоживущий» маркер инфаркта миокарда - нормализация показателя происходит, как правило, за 24 часа. В этом и заключается его уникальная диагностическая ценность. Если уровень миоглобина остается повышенным после острого приступа инфаркта миокарда – это свидетельство расширение зоны инфаркта. Повторные повышения уровня миоглобина в крови на фоне уже начавшейся нормализации говорит об образовании новых некротических очагов (рис.  2). Таким образом, миоглобин – очень важен для диагностики повторного инфаркте миокарда. Существенным недостатком этого маркера является его низкая специфичность - он появляется в крови также и при повреждении скелетных мышц.

Рис. 2. Динамика концентрации миоглобина (синий цвет кривой) и тропонина (зеленый цвет кривой) в крови при повторном инфаркте миокарда.

 Пациентам с подозрением на острый инфаркт миокарда следует проводить одновременное определение трех кардиомаркеров - тропонина, CK-MB и миоглобина. Это не только существенно повышает точность диагностики инфаркта миокарда, но и позволяет определить время от начала некроза кардиомиоцитов (Рис. 3).

Рис. 3. Динамика концентрации кардиального тропонина I (сТnI), сердечной формы креатинкиназы (СК-МВ) и миоглобина (Мyo)в крови при инфаркте миокарда.

Свойства маркеров инфаркта миокарда можно резюмировать следующим образом:

В ургентных ситуациях, в частности, в условиях скорой помощи, определять кардиомаркеры необходимо экспресс-методом, поскольку, фактор времени на постановку диагноза имеет критическое значение.

D-димер представляет собой фрагменты молекулы фибрина, образующиеся при его распаде (протеолитической деградации) под действием плазмина. Он называется «димер», так как содержит два соединяющихся D фрагмента фибрина. Наличие в плазме крови D-димера свидетельствует об образовании и деградации фибринового сгустка внутри сосудистого русла и отражает активацию, как коагуляции, так и фибринолиза.

Процесс образования D-димера состоит из нескольких этапов:

• протеолитическая деградация фибриногена под действием тромбина, отщепление от него фибринопептидов А и В и образование фибрин-мономеров;
• самопроизвольная полимеризация фибрин-мономеров в растворимый фибрин-полимер;
• стабилизация растворимого фибрин-полимера в нерастворимый тромб под действием фактора XIIIа, образующего ковалентные связи («поперечные сшивки») между находящимися рядом D-доменами фибрин-мономеров в присутствии ионов Ca 2+ ;
• деградация нерастворимого поперечно сшитого фибрина под действием активного плазмина.

Действие фибринолитической системы направлено на лизис фибрина. В результате образуется смесь продуктов деградации фибрина/фибриногена (ПДФ) (рис. 4).

Рис. 4. Образование и распад фибрина. 

Продуктами деградации фибрина (полимерной молекулы) являются более крупные фрагменты – D-димеры, тримеры и другие вещества, содержащие ковалентные D-D связи, не разрушаемые плазмином.

Референсные значения: < 243 нг/мл (1 нг/мл соответствует 1 DDU, D-Dimer Unit – единицы D-димера).

Повышение концентрации D-димера выше референсных значений может быть при тромбозах любой локализации, а также заболеваниях и состояниях, вызывающих повышение D-димера в крови, в частности, синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома)  массивных повреждениях тканей или хирургических операциях, инфекциях, воспалительных процессах и др.

Повышение D-димера в плазме наблюдается примерно через 2 ч после начала тромбоза. D-димер  выводится почками, время его полужизни при сохранной функции почек составляет приблизительно 6-8 часов. 

Рис. 5. Образование BNP и NT-proBNP. 

1. Андрияшкин А. В. и др. Российские клинические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике венозных тромбоэмболических осложнений (ВТЭО) //Флебология. – 2015. – Т. 2. – №. 4. – С. 2.
2. Куликов А. В. и др. Интенсивная терапия острых нарушений гемостаза в акушерстве (ДВС-синдром). Клинические рекомендации (протоколы лечения) //Анестезиология и реаниматология. – 2017. – Т. 62. – №. 5. 
3. Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19) //Москва: Министерство здравоохранения Российской Федерации. Версия 10. – 2021.
4. Соловьева И.В. Д-димер.Диагностическое значение, методы измерения, интерпретация результатов.
5. Johnson E. D., Schell J. C., Rodgers G. M. The D‐dimer assay //American journal of hematology. – 2019. – Т. 94. – №. 7. – С. 833-839.
6. Konstantinides S. V. et al. 2019 ESC Guidelines for the diagnosis and management of acute pulmonary embolism developed in collaboration with the European Respiratory Society (ERS) The Task Force for the diagnosis and management of acute pulmonary embolism of the European Society of Cardiology (ESC) //European heart journal. – 2020. – Т. 41. – №. 4. – С. 543-603.
7. Lim W. et al. American Society of Hematology 2018 guidelines for management of venous thromboembolism: diagnosis of venous thromboembolism //Blood advances. – 2018. – Т. 2. – №. 22. – С. 3226-3256.
8. Thachil J. et al. ISTH interim guidance on recognition and management of coagulopathy in COVID‐19 //Journal of Thrombosis and Haemostasis. – 2020. – Т. 18. – №. 5. – С. 1023-1026.
9. Toh C. H., Alhamdi Y., Abrams S. T. Current pathological and laboratory considerations in the diagnosis of disseminated intravascular coagulation //Annals of laboratory medicine. – 2016. – Т. 36. – №. 6. – С. 505.
10. Weitz J. I., Fredenburgh J. C., Eikelboom J. W. A test in context: D-dimer //Journal of the American College of Cardiology. – 2017. – Т. 70. – №. 19. – С. 2411-2420.