Важный компонент системы «автоматизированный анализ крови» – реагенты

Глава из монографии В.С.Антонова, Н.В. Богомоловой, А.С.Волкова «Автоматизация гематологического анализа. Интерпретация показателей гемограммы»

Важный компонент системы «автоматизированный анализ крови» – реагенты. Лаборатория, получив гематологический анализатор, сталкивается с необходимостью нести довольно ощутимые постоянные затраты на реагенты. Количество разных реагентов, используемых анализатором, существенно влияет на себестоимость и качество исследований.

 

Каждый конкретный тип гематологического анализатора рассчитан на свою собственную реагентную систему, однако между ними есть много общего.

 

Основными составляющими комплектов реагентов для гематологических анализаторов являются:

 

В зависимости от конкретной конструкции анализатора в базовый комплект может входить лишь часть указанных реагентов.

 

Изотонический разбавитель – это буферный раствор с фиксированными параметрами рН, электропроводности и осмолярности. Слово «изотонический» указывает только на одно и не самое важное свойство реагента – поддержание требуемого осмотического давления с целью обеспечения постоянства объема клеток крови. Дело в том, что эритроциты принимают тот объем, который им диктует осмолярность раствора. При увеличении осмолярности, в течение 3 – 5 секунд эритроциты сжимаются до некоторого равновесного объема. Если осмолярность раствора уменьшается, объем эритроцитов, соответственно, увеличивается. Таким образом, средний объем эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. Использование изотонического разбавителя, не соответствующего марке анализатора, может привести к ложному завышению/занижению среднего объёма эритроцита MCV.

 

Стабилизирующие добавки в изотоническом разбавителе обеспечивают сохранность форменных элементов крови в первом разведении в течение достаточно длительного времени. Присутствие в растворе антикоагулянта должно эффективно предотвращать образование фибриновых сгустков и агрегацию тромбоцитов.

 

Очень важными компонентами гематологических реагентов и, в частности, изотонических разбавителей являются антибактериальные добавки, которые препятствуют бактериальному заражению гидравлических магистралей анализаторов. Бактериостатики, как правило, негативно влияют на клеточные мембраны, поэтому их выбор довольно ограничен.

 

Другим важнейшим реагентом является лизирующий раствор (гемолитик), который при добавлении в разведение крови вызывает лизис эритроцитов и в то же время сохраняет лейкоциты. Необходимо, чтобы гемолиз эритроцитов был качественный и полный, поскольку в гемолизате подсчитываются лейкоциты, которых примерно в 1000 раз меньше, чем эритроцитов. Для обеспечения этих свойств лизирующий раствор, как правило, содержит сложную композицию ионных поверхностно-активных соединений.

 

В анализаторах с дифференциацией лейкоцитов на три популяции лейкоциты под действием лизирующего раствора изменяют свои размеры так, что могут быть выделены фракция лимфоцитов (первый пик лейкоцитарной гистограммы), гранулоциты (крайний правый пик лейкоцитарной гистограммы). В средней части гистограммы, в области так называемых «средних» клеток, расположены моноциты, базофилы и эозинофилы. Наряду с факторами пробоподготовки, свойства реагентной системы оказывают существенное влияние на качество дифференциации лейкоцитов.

 

Следует иметь в виду, что для всех гематологических анализаторов с дифференциацией лейкоцитов на три популяции, оптимальной является работа с цельной кровью.

 

Изотонический разбавитель для гематологических анализаторов, проводящих дифференциацию лейкоцитов на три популяции, содержит специальные добавки, модифицирующие мембраны лейкоцитов. «Работает» такой изотонический разбавитель только в согласованной паре с соответствующим лизирующим раствором.

 

NB! Нельзя совмещать в пару «изотонический раствор – лизирующий реагент» компоненты от разных производителей!

 

Промывающие растворы не участвуют непосредственно в процессе измерения, однако их свойства существенно влияют на стабильность аналитических характеристик анализаторов. Характерной особенностью гематологических анализаторов, использующих принцип Культера, является наличие счетных апертур малого диаметра. Кровь содержит в себе ряд веществ, которые имеют тенденцию осаждаться на апертуре и внутренней поверхности гидравлической системы. Это постепенно приводит к уменьшению диаметра, засорению апертуры и ошибочным результатам. В некоторых случаях прибор просто останавливается и требует тщательной промывки. Таким образом, качество промывающих растворов влияет на долговременную стабильность работы прибора.

 

Промывающие растворы бывают, в основном, трех типов. Первый тип – растворы для мягкой промывки магистралей анализатора между пробами, они не содержат поверхностно-активных веществ (детергентов) в значительных концентрациях. К сожалению, детергентные промывающие растворы практически не удаляют белки. Поэтому для очистки от белковых осадков применяют растворы на основе гипохлорита натрия – второй тип промывающих растворов. Эти растворы являются очень сильными депротеинизаторами. Однако, раствор гипохлорита натрия – очень едкое вещество, долгого контакта с ним не выдерживают детали из пластика (они трескаются), металла (подвергаются коррозии). Поэтому злоупотреблять такими растворами нельзя. Данные растворы, в основном, применяются в экстренных случаях, когда необходимо быстро очистить счетную апертуру, а также для сервисных работ.

 

Современное решение проблемы качественной промывки прибора – применение ферментативных промывающих растворов (третий тип). Благодаря наличию ферментов, такие растворы эффективно удаляют адсорбированные на стенках гидравлической системы белки и другие вещества. При этом они совершенно нейтральны и не оказывают вредного действия на детали прибора даже при длительной экспозиции.