Гематология:
14.11.2019
Важный компонент системы «автоматизированный анализ крови» – реагенты
Важный компонент системы «автоматизированный анализ крови» – реагенты. Лаборатория, получив гематологический анализатор, сталкивается с необходимостью нести довольно ощутимые постоянные затраты на реагенты. Количество разных реагентов, используемых анализатором, существенно влияет на себестоимость и качество исследований.
Каждый конкретный тип гематологического анализатора рассчитан на свою собственную реагентную систему, однако между ними есть много общего.
- изотонический разбавитель;
- лизирующий раствор;
- промывающий раствор (после каждой пробы);
- промывающий раствор (для качественной очистки системы);
- очищающий раствор (для экстренной очистки датчика и/или сервисных работ).
В зависимости от конкретной конструкции анализатора в базовый комплект может входить лишь часть указанных реагентов.
Изотонический разбавитель – это буферный раствор с фиксированными параметрами рН, электропроводности и осмолярности. Слово «изотонический» указывает только на одно и не самое важное свойство реагента – поддержание требуемого осмотического давления с целью обеспечения постоянства объема клеток крови. Дело в том, что эритроциты принимают тот объем, который им диктует осмолярность раствора. При увеличении осмолярности, в течение 3 – 5 секунд эритроциты сжимаются до некоторого равновесного объема. Если осмолярность раствора уменьшается, объем эритроцитов, соответственно, увеличивается. Таким образом, средний объем эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. Использование изотонического разбавителя, не соответствующего марке анализатора, может привести к ложному завышению/занижению среднего объёма эритроцита MCV.
Стабилизирующие добавки в изотоническом разбавителе обеспечивают сохранность форменных элементов крови в первом разведении в течение достаточно длительного времени. Присутствие в растворе антикоагулянта должно эффективно предотвращать образование фибриновых сгустков и агрегацию тромбоцитов.
Очень важными компонентами гематологических реагентов и, в частности, изотонических разбавителей являются антибактериальные добавки, которые препятствуют бактериальному заражению гидравлических магистралей анализаторов. Бактериостатики, как правило, негативно влияют на клеточные мембраны, поэтому их выбор довольно ограничен.
В анализаторах с дифференциацией лейкоцитов на три популяции лейкоциты под действием лизирующего раствора изменяют свои размеры так, что могут быть выделены фракция лимфоцитов (первый пик лейкоцитарной гистограммы), гранулоциты (крайний правый пик лейкоцитарной гистограммы). В средней части гистограммы, в области так называемых «средних» клеток, расположены моноциты, базофилы и эозинофилы. Наряду с факторами пробоподготовки, свойства реагентной системы оказывают существенное влияние на качество дифференциации лейкоцитов.
Следует иметь в виду, что для всех гематологических анализаторов с дифференциацией лейкоцитов на три популяции, оптимальной является работа с цельной кровью.
Изотонический разбавитель для гематологических анализаторов, проводящих дифференциацию лейкоцитов на три популяции, содержит специальные добавки, модифицирующие мембраны лейкоцитов. «Работает» такой изотонический разбавитель только в согласованной паре с соответствующим лизирующим раствором.
NB! Нельзя совмещать в пару «изотонический раствор – лизирующий реагент» компоненты от разных производителей!
Промывающие растворы не участвуют непосредственно в процессе измерения, однако их свойства существенно влияют на стабильность аналитических характеристик анализаторов. Характерной особенностью гематологических анализаторов, использующих принцип Культера, является наличие счетных апертур малого диаметра. Кровь содержит в себе ряд веществ, которые имеют тенденцию осаждаться на апертуре и внутренней поверхности гидравлической системы. Это постепенно приводит к уменьшению диаметра, засорению апертуры и ошибочным результатам. В некоторых случаях прибор просто останавливается и требует тщательной промывки. Таким образом, качество промывающих растворов влияет на долговременную стабильность работы прибора.
Промывающие растворы бывают, в основном, трех типов. Первый тип – растворы для мягкой промывки магистралей анализатора между пробами, они не содержат поверхностно-активных веществ (детергентов) в значительных концентрациях. К сожалению, детергентные промывающие растворы практически не удаляют белки. Поэтому для очистки от белковых осадков применяют растворы на основе гипохлорита натрия – второй тип промывающих растворов. Эти растворы являются очень сильными депротеинизаторами. Однако, раствор гипохлорита натрия – очень едкое вещество, долгого контакта с ним не выдерживают детали из пластика (они трескаются), металла (подвергаются коррозии). Поэтому злоупотреблять такими растворами нельзя. Данные растворы, в основном, применяются в экстренных случаях, когда необходимо быстро очистить счетную апертуру, а также для сервисных работ.
Современное решение проблемы качественной промывки прибора – применение ферментативных промывающих растворов (третий тип). Благодаря наличию ферментов, такие растворы эффективно удаляют адсорбированные на стенках гидравлической системы белки и другие вещества. При этом они совершенно нейтральны и не оказывают вредного действия на детали прибора даже при длительной экспозиции.