Вакуумные пробирки UNIVAC для измерения содержания глюкозы с Na фторидом и К оксалатом

Назначение:пробирки предназначены для взятия венозной крови для определения содержания глюкозы в плазме/сыворотке крови

Производитель:ООО «Эйлитон», Россия

Цвет крышки:серый

Наполнитель:фторид натрия и оксалат калия

*Продажа товаров осуществляется только Юридическим Лицам

Ассортимент вакуумных пробирок UNIVAC® с Na фторидом и К оксалатом:

Информация о наполнителях и особенности преаналитического этапа при анализе глюкозы в плазме/сыворотке крови

Функция наполнителя Na фторида состоит в ингибировании процессов гликолиза, приводящих к утилизации глюкозы ex vivo в течение срока хранения пробы от взятия крови до выполнения исследования и, следовательно, таким образом, предотвращению занижения результатов анализа.

Механизм действия оксалата калия схож с ЭДТА (связывание кальция). 

При измерении концентрации глюкозы после взятия образца крови необходимо максимально быстро отделить плазму или сыворотку от форменных элементов крови [2]. Это очень важно, поскольку концентрация глюкозы при хранении образца крови ex vivo очень быстро снижается в связи ее потреблением клетками крови.

Эритроцит является метаболически активной клеткой и содержит более 40 различных ферментов. Энергетическое обеспечение эритроцита осуществляется за счет утилизации глюкозы в реакциях гликолиза. В результате гликолиза при комнатной температуре фосфорилируется около 5-7% глюкозы крови в час при концентрациях, близких к референсному интервалу, что в абсолютных величинах соответствует изменению концентрации на 0,3 – 0,4 ммоль/л. Более высокая скорость потери глюкозы будет иметь место при повышенной температуре окружающей среды и в образцах с высоким содержанием лейкоцитов [5, 7]. 

Т.о., если время хранения пробы крови до проведения отделения сыворотки/плазмы исследования превышает 1 час, надо использовать пробирки с фторидом. 

Снижение концентрации глюкозы при хранении пробы крови перед исследованием может стать причиной пропуска случаев диабета у большого числа пациентов с концентрациями глюкозы, близкими к значениям «сut-off». 

Снизить степень влияния гликолиза на результат анализа можно, используя для взятия крови пробирки с фторидом натрия. Фторид натрия (2,5 мг/мл крови) ингибируют енолазу (фосфопируватгидратазу) – один из ферментов гликолитического пути [4].

Но надо учитывать тот факт, что в первый час после взятия образца крови даже использование фторида не может предотвратить снижение концентрации глюкозы, связанное с процессами гликолиза! В экспериментальных исследованиях было показано, что уровни снижения концентрации глюкозы в первый час после взятия образца крови в пробирки с фторидом и без него практически идентичны [6].

Это обусловлено тем, что енолаза участвует в девятом, предпоследнем этапе гликолиза. Она катализирует переход 2-фосфо-D-глицериновой кислоты в фосфоенолпируват (Рис.1).

Рис.1. Схема гликолиза.

Таким образом, несмотря на то, что присутствующий в пробе крови фторид, быстро блокирует енолазу (в течение <5 минут), ферменты перед енолазой в гликолитическом пути остаются активными. Поэтому глюкоза продолжает метаболизироваться в эритроцитах до глюкозо-6-фосфата, который далее метаболизируется до других фосфорилированных метаболитов, приводя к занижению определяемой концентрации глюкозы в плазме/сыворотке крови. 

Скорость фосфорилирования глюкозы до глюкозо-6-фосфата зависит от поступления АТФ. Как видно из схемы гликолиза (Рис.1), до восьмого этапа в реакциях гликолиза сохранялся нулевой баланс АТФ (на первом и третьем этапе расходовалось 2 молекулы АТФ, на седьмом этапе образовывалось 2 молекулы АТФ). На десятом этапе в результате превращения фосфоенолпирувата в пируват образуется 2 молекулы АТФ. Таким образом, блокирование фторидом натрия процесса гликолиза на 9 этапе, предотвращает синтез новых молекул АТФ, и зависимые от концентрации АТФ реакции 1 и 3 стадии гликолиза останавливаются. Экспериментально было показано, что через 60 мин после добавления фторида синтез АТФ в эритроцитах снижается почти на 90%. Это отражается на динамике снижения концентрации глюкозы в цельной крови - в течение последующих 3 часов концентрация глюкозы в крови в присутствии фторида натрия снижается уже незначительно и с 4-х до 72-х часов остается стабильной [3].

Поэтому для получения корректных результатов концентрации глюкозы в плазме/сыворотке крови важно обеспечивать быстрое отделение сгустка. Это наиболее эффективно минимизирует потери глюкозы, связанные с ее утилизацией эритроцитами.

После взятия пробы пробирки следует перемешать, переворачивая 6–8 раз. Пробирки с фторидом необходимо перемешивать с особой осторожностью во избежание гемолиза.

Полученную после центрифугирования сыворотку/плазму можно хранить – 24 часа при комнатной температуре и 72 часа при + 4^oС [1]. 

Список литературы:

1. 1. Г. Б. Алан Клиническое руководство Тица по лабораторным тестам //М.: Лабора. – 2013.  

2. 2. Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. В 2 томах. Том 1. Под ред. В.В.Долгова, В.В.Меньшикова //М.: ГЭОТАР-Медиа. – 2012.  

3. 3. Chan AY, Swaminathan R, Cockram CS. Effectiveness of sodium fluoride as a preservative of glucose in blood. Clin Chem 1989; 35:315–7.

4. 4. David B. Sacks, M. Sue Kirkman, Mark Arnold, Ake Lernmark, George L. Bakris, Boyd E. Metzger, David E. Bruns, David M. Nathan, Andrea Rita Horvath. Guidelines and Recommendations for Laboratory Analysis in the Diagnosis and Management of Diabetes Mellitus. Clin Chem. 2011 Jun;57(6): р.1-47.

5. 5. David E. Bruns, William C. Knowler. Stabilization of Glucose in Blood Samples: Why It Matters. Clin Chem. 2009 May; 55(5): 850–852.

6. 6. Leann M Mikesh, David E Bruns Stabilization of Glucose in Blood Specimens: Mechanism of Delay in Fluoride Inhibition of Glycolysis. Clinical Chemistry, Volume 54, Issue 5, 1 May 2008, Pages 930-932.

7. 7. Joanna Jung, Emily Garnett, Kesha Rector, Purviben Jariwala, Sridevi Devaraj Effect of Collection Tube Type on Glucose Stability in Whole Blood. Ann Clin Lab Sci. 2020 Jul;50(4): 557-559.