ЮНИТЕКА:

Гематология:

Окраска гематологических препаратов. Как оптимизировать этот процесс?

Куриляк О.А., к.б.н.

Исследование морфологии клеток уже много десятилетий является «золотым стандартом» диагностики в гематологии. Поэтому к качеству мазка крови в гематологической лаборатории предъявляются очень высокие требования. В правильно приготовленном мазке крови должна быть сохранена целостность клеток, они должны находиться в монослое и располагаться по поверхности стекла равномерно, оканчивается такой мазок щеточкой.

При окраске мазка надо стремиться к выполнению следующих условий:

  • розовая окраска гемоглобина;
  • зернистость нейтрофилов хорошо прокрашена фиолетовым цветом на розовом фоне;
  • зернистость эозинофилов окрашена оранжево-красным цветом;
  • зернистость базофилов - фиолетового или темно-синего цвета;
  • нежная азурофильная зернистость моноцитов;
  • ядра лейкоцитов фиолетово-красного цвета с хорошо видимой структурой хроматина;
  • хорошо выделяются ядрышки;
  • цитоплазма нейтрофилов светло-розовая;
  • цитоплазма лимфоцитов голубого, серо-голубого или сине-голубого цвета.

От чего же зависит качество окраски элементов клеточных структур? Зависит оно от 5-ти основных условий:

  1. Вида и состава красителя.
  2. Концентрации красителя, которая не всегда определяет красящую способность.
  3. Продолжительности окраски.
  4. Возраста окрашиваемого препарата. Препараты от 6 часов и до нескольких дней давности в большинстве случаев теряют мелкие структурные тонкости;
  5. pH среды. Этот показатель оказывает сильное влияние на окрашиваемость и тон окраски. Поэтому для приготовления рабочего раствора красителя необходимо брать не воду, а буферный раствор.

Варьируя этими параметрами, подбираются оптимальные условия окраски.

По нашей просьбе в НИИ Детской Гематологии МЗ РФ профессором Владимирской Е.Б. проведена сравнительная оценка оптимального использования гематологических красителей. Всего было окрашено и проанализировано 2 868 мазков крови, в том числе 126 мазков с бластемией и 118 мазков костного мозга. Для окраски мазков использовали азур-эозин по Романовскому от трех российских производителей, эозин-метиленовый синий по Майн-Грюнвальду, эозин-метиленовый синий по Лейшману и фиксатор-краситель «Гемокрафикс». Для первого красителя изучали 2 фиксатора (по Май-Грюнвальду и по Лейшману). Для всех красителей подбиралось оптимальное время фиксации, оптимальное время экспозиции краски и оптимальное разведение краски Каждый вариант отрабатывался при окрашивании на рельсах и в ванночках. В последнем случае изучалась длительность срока годности разведенной краски на протяжении 10 дней.

В результате проведенной работы были сделаны следующие выводы:

  • Для плановой рутинной окраски препаратов крови и костного мозга, в норме и патологии, в качестве базовой краски рекомендуется Азур-эозин по Романовскому (кат.№ ГР 50008 по Прайс-Листу А/О Юнимед). Преимущество этого красителя заключается в том, что хорошая окраска препаратов достигается при его очень экономном расходовании: разведение буфером в 40 раз и сохранение оптимальных красящих свойств раствора в течение 7-10 дней. При этом в качестве фиксатора могут быть применены красители-фиксаторы Майн-Грюнвальд (кат.№ ГР 50009 по Прайс-Листу А/О Юнимед) или Лейшман (кат.№ ГР 50003 по Прайс-Листу А/О Юнимед), которые в случае необходимости могут быть использованы в экспресс-диагностике для быстрого окрашивания. Для всех концентраций краски всех сроков хранения, 15 минут экспозиции оказались достаточными для оптимального окрашивания мазков крови как с нормальными клетками, так и с лейкемическими бластами. Для окраски же препаратов костного мозга длительность окрашивания должна составлять не менее 30 мин.
  • Плановую окраску препаратов можно проводить также и с помощью «Гемокрафикс» (кат.№ 37,04 по каталогу А/О Юнимед). Преимуществом этой краски является то, что она может быть использована как для фиксации, так и для окрашивания (в разной концентрации). Эта же краска может быть использована и для экспресс-диагностики. Время фиксации микропрепарата в неразведенном красителе - 1,5 мин. Оптимальное разведение краски для окрашивания мазка крови - 1:3. Оптимальное время окраски 5 – 15 мин. Расход этой краски значительно выше, чем краски Романовского, возможность сохранения в растворе ниже (до 3- суток).
  • Краситель-фиксатор Лейшмана (кат.№ 37,03 по каталогу А/О Юнимед) также может быть использована для планового окрашивания препаратов. Время, достаточное для фиксации препаратов – 0,5 мин инкубации препаратов с неразведенным красителем. Увеличение времени фиксации до 3 мин влияет на результаты окрашивания. Оптимальное разведение краски для окрашивания – 1:3 (разведение буферным раствором). Оптимальное время окраски – 5 мин. Поскольку расход данного красителя достаточно высок (ввиду небольшого разведения) и в растворе он более одного дня не сохраняется, то рекомендуется использовать краску Лейшмана в основном для экспресс-диагностики.
  • При использовании красителей-фиксаторов (Майн-Грюнвальд, Лейшман, Гемокрафикс) рекомендуется готовить рабочие растворы нужной концентрации в стаканчике (а не на мазке), используя их для окраски вслед за ополаскиванием мазка после фиксации.
  • Качественно выполнить окраску мазков помогает устройство для окраски мазков УФОМК-01-"Эйлитон" (Минилаб 301) (кат. № ВС 05001 по каталогу А/О Юнимед).

«Минилаб-301» позволяет оптимальным образом организовать рабочее место лаборанта для окраски мазков.

Окраска производится в штативе в просторных ванночках, которые закрываются крышками. Ванночки компактно размещены на удобном подносе, что исключает нежелательное разбрызгивание краски.

Четыре независимо программируемых таймера помогают лаборанту строго выдерживать временные режимы окраски мазков.

Вместо ручных манипуляций с каждым отдельным стеклом лаборант обрабатывает штатив, перенося его из ванночки в ванночку или сушильную камеру строго по звуковым сигналам таймеров. В штативе можно разместить до 25 стекол (причем можно использовать как импортные стекла, так и стекла отечественного производства). Окраску можно проводить одновременно в нескольких ванночка. В результате существенно сокращается время на окраску большой партии мазков. Установка таймеров на новое время окраски в зависимости от вида, состава и качества используемого красителя не вызывает никаких затруднений. Освоить прибор несложно благодаря простоте конструкции и хорошо написанной инструкции по эксплуатации.

Отсек сушки мазков обеспечивает высушивание за 3 минуты благодаря оптимально подобранным температуре и скорости потока воздуха.

Комплект принадлежностей к «Минилабу-301» включает поддон, 4 штатива для предметных стекол и 4 кюветы для красителей, фиксаторов, отмывочных растворов.

Это позволяет:

  • проводить одновременное окрашивание до 100 мазков;
  • параллельно окрашивать мазки по нескольким (до 4-х) различным методикам;
  • в несколько раз ускорить процесс высушивания окрашенных препаратов (сушка 25 мазков занимает не более 3 мин).
Теги: